免疫沉淀
(1)技術(shù)原理
免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法??贵w與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后,再與Protein A/G或二抗偶聯(lián)的agaose或Sepharose beads孵育,通過離心得到beads-protein A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物,沉淀經(jīng)洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,煮沸5-10 min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括目的蛋白和少量的雜蛋白。
(2)技術(shù)應(yīng)用
免疫沉淀常用于測(cè)量蛋白質(zhì)抗原的相對(duì)分子質(zhì)量,監(jiān)控其翻譯后修飾,研究蛋白質(zhì)的半衰期等。
【服務(wù)內(nèi)容】
蛋白質(zhì)抽取與定量;IP產(chǎn)物的SDS-PAGE;IP(以normal lgG作為對(duì)照);western blot或質(zhì)譜分析。
(1)客戶須明確檢測(cè)目的和具體要求,最好能提供1~2篇文獻(xiàn)或資料;
(2)客戶提供待檢測(cè)樣品、免疫沉淀用抗體(也可由我方代購(gòu));
(3)待檢測(cè)樣品可以是直接待檢測(cè)蛋白樣品,也可以是細(xì)胞、組織或細(xì)菌樣品,需加收蛋白抽提費(fèi)用。樣本收集后應(yīng)立即-80℃保存。