雙熒光素酶報告基因檢測（microRNA 靶基因驗(yàn)證）
（1）技術(shù)原理
雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)也是驗(yàn)證microRNA與靶基因或靶位點(diǎn)相互作用的常用技術(shù)。miRNAs常與靶基因的非翻譯區(qū)（常為3’UTR）結(jié)合，從而抑制整個mRNA的翻譯。在體外驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，常將預(yù)測靶基因的3’UTR或預(yù)測靶位點(diǎn)構(gòu)建至熒光素酶編碼區(qū)的下游，從而根據(jù)發(fā)光情況判斷mRNA與預(yù)測靶基因的直接作用關(guān)系。
（2）技術(shù)應(yīng)用
microRNA廣泛存在于動物、植物、真菌及病毒的基因組中，調(diào)控生物體生長發(fā)育和各種疾病發(fā)生等過程中相關(guān)基因的表達(dá)。它的異常表達(dá)可能會導(dǎo)致生理狀態(tài)的異常和疾病的產(chǎn)生，在多種癌癥中，miRNA的表達(dá)水平會發(fā)生明顯改變，有可能引起原癌基因和抑癌基因的異常表達(dá)，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生惡化等。此外，在許多其他的病變組織或細(xì)胞中也檢測到了miRNA的異常表達(dá)。miRNA可同時調(diào)控多個靶基因，從而影響細(xì)胞的功能。miRNA調(diào)控靶基因的驗(yàn)證常是熒光報告素酶活性檢測，結(jié)合軟件預(yù)測及蛋白驗(yàn)證，提高靶點(diǎn)預(yù)測的精確性及可行性。
【服務(wù)內(nèi)容】
構(gòu)建熒光素酶載體（或客戶自備載體）；細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染；熒光素酶檢測；數(shù)據(jù)分析。
【客戶須知及標(biāo)本要求】
（1）客戶須明確檢測目的和具體要求，最好能提供1~2篇文獻(xiàn)或資料；
（2）客戶可自備載體；
（3）客戶需提供：miRNA與靶基因的信息；相應(yīng)檢測細(xì)胞株。
